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枯草芽孢杆菌的启动子筛选

2016/8/16 10:04:01点击:
        枯(ku)草(cao)芽孢杆(gan)菌(jun)因其独(du)特的(de)代谢(xie)途径、常被(bei)用于(yu)合成生物(wu)学(xue)(xue)和(he)(he)代谢(xie)工程,因此,需要对其内在生物(wu)部件进行(xing)评估(gu),目(mu)的(de)是(shi)确定最(zui)佳策略来调节代谢(xie)通路和(he)(he)表达目(mu)标蛋白(bai)。通过报(bao)告(gao)基因表达量(如绿色荧光蛋白(bai)的(de)荧光单位)评估(gu)启动子强弱是(shi)一种常用方法。中国科(ke)学(xue)(xue)院天津工业生物(wu)技术研究(jiu)所张大(da)伟(wei)课题组对枯(ku)草(cao)芽孢杆(gan)菌(jun)的(de)启动子作了筛选与鉴(jian)定,相关(guan)结果发(fa)表在《PLOS ONE》杂志(zhi)上(shang)。
     在这(zhei)项研(yan)究(jiu)中,研(yan)究(jiu)人员测试了84个、分(fen)布在不(bu)(bu)同(tong)蛋白(bai)(bai)上游(you)的(de)(de)预测启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi),不(bu)(bu)同(tong)蛋白(bai)(bai)包括热激蛋白(bai)(bai)和细胞(bao)壁蛋白(bai)(bai)等(deng)。测试发现84个启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)活性是最强(qiang)启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi)P43的(de)(de)0.0023-4.53倍不(bu)(bu)等(deng)。这(zhei)些(xie)启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi)在高温或是有乙(yi)醇(chun)的(de)(de)培养基中的(de)(de)活性变化(hua)不(bu)(bu)大,但有些(xie)在高渗(shen)透压下(xia)活性有所提(ti)高。从中随机挑选(xuan)了启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi)用(yong)(yong)于启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)耐热β-半乳糖苷(gan)酶(mei)的(de)(de)表(biao)达,结果发现转录(lu)水平相当,说明这(zhei)些(xie)启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi)可(ke)在不(bu)(bu)同(tong)遗传(chuan)背景下(xia)发挥作用(yong)(yong)。此外(wai),从中挑选(xuan)的(de)(de)启(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)动(dong)(dong)(dong)子(zi)(zi)(zi)可(ke)使(shi)胞(bao)质β-半乳糖苷(gan)酶(mei)和α-淀粉酶(mei)(分(fen)泌蛋白(bai)(bai))的(de)(de)转录(lu)分(fen)别提(ti)高4倍和2倍。这(zhei)项研(yan)究(jiu)所得到的(de)(de)数(shu)据使(shi)得我们对枯草芽(ya)孢(bao)杆(gan)菌的(de)(de)代谢有了更深的(de)(de)了解,便于我们今(jin)后对它的(de)(de)改造利用(yong)(yong)。